取膀胱截石位，将窥器以少量生理盐水润滑后放入阴道内，暴露子宫颈，以干棉签从阴道上1/3侧壁刮取分泌物，并在清洁载玻片上均匀涂抹；另取1根棉签（化纤成分为宜）于相同部位刮取分泌物，置于试管内。无性生活者仅使用棉签进入其阴道取标本，方法同上。

1. 形态学检测：阴道分泌物涂片，干燥、固定后，行革兰染色，油镜下检查阴道菌群。

2. 功能学检测：用留取阴道分泌物的湿棉签，检测需氧菌、厌氧菌、真菌、滴虫等的代谢产物、酶的活性及pH值。

1. 形态学检测指标：

（1）阴道菌群密集度：标本(微生境)中细菌分布、排列的密集程度；结合标本来源的微生境容积大小，可以反映出某微生态区域中菌群总生物量的多少。分级标准：

Ⅰ级(+)：油镜(放大倍数10×100倍)观察每个视野的平均细菌数为1～9个；

Ⅱ级(++)：油镜观察每个视野的平均细菌数为10～99个；

Ⅲ级(+++)：油镜下每个视野的平均细菌数为100个及以上；光镜下观察，细菌满视野；

Ⅳ级(++++)：油镜下观察，细菌聚集成团或密集覆盖黏膜上皮细胞。

（2）阴道菌群多样性：涂片中所有细菌种类的多少。分级标准：

Ⅰ级(+)：能辨别1～3种细菌；

Ⅱ级(++)：能辨别4～6种细菌；

Ⅲ级(+++)：能辨别7～9种细菌；

Ⅳ级(++++)：能辨别10种及以上细菌。

（3）优势菌：菌群中生物量或种群密集度大的细菌，在很大程度上影响着整个菌群的功能且其对宿主的生理病理影响大。

①以革兰阳性杆菌为优势菌：革兰染色阳性，无芽孢，细长弯曲或呈球杆状、杆状，单个或双链状，无动力。大多为乳杆菌。

②以革兰阳性球菌或革兰阳性弧菌为优势菌：革兰染色阳性，无芽孢，呈细长弯曲或球状，无动力。常见的细菌为链球菌。

③革兰阴性短杆菌或革兰阴性弧菌为优势菌：革兰染色阴性或不定，无芽孢，短杆状或杆状，形态比乳杆菌小。常见的细菌为：(a)加德纳菌：革兰阴性短杆菌或革兰阴性小变形杆菌；(b)普雷沃菌：革兰阴性杆菌；(c)动弯杆菌：弯曲的革兰阴性杆菌，革兰染色变异，弯曲、弧形的小杆菌。

（4）菌群抑制及菌群增殖过度：①菌群抑制：标本中细菌明显减少，表现为无优势菌，密集度为≤Ⅰ级，多样性为≤Ⅰ级。②菌群增殖过度：以形态类似乳杆菌的革兰阳性杆菌为优势菌，密集度和多样性均为Ⅲ～Ⅳ级，常见于细胞溶解性阴道病。

（5）病原微生物：指可造成阴道不同感染性疾病的病原微生物，显微镜镜检阴道分泌物中是否存在滴虫或真菌假菌丝、芽生孢子、孢子等。

①真菌检测：油镜下可发现真菌卵圆形孢子、芽生孢子或管状的假菌丝，革兰染色阳性。当镜检发现芽生孢子或假菌丝时，应报告为外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）。

②滴虫检测：革兰染色阳性，较白细胞略大，形态不规则，内有食物泡，周边有大量的白细胞或上皮细胞碎片，发现滴虫，可诊断为滴虫阴道炎。

（6）Nugent 评分：Nugent 评分是国际通用的较准确诊断细菌性阴道病（bacterial vaginosis，BV）的方法[4]。Nugent评分0～3分，为正常；4～6分，诊断中间型BV；≥7分，诊断BV。

（7）需氧菌性阴道炎及Donders评分：需氧菌性阴道炎(aerobic vaginitis，AV)是由需氧菌繁殖伴产H2O2的乳杆菌的减少或缺失，导致阴道黏膜充血、水肿，产生脓性分泌物的阴道炎症[5]。常见的病原菌包括B族链球菌、葡萄球菌、大肠埃希菌及肠球菌等需氧菌。目前尚无规范化、公认的AV诊断标准。其诊断主要根据临床特征及Donders评分，阴道分泌物显微镜下Donders评分≥3分。见表2。 

（8）阴道分泌物的白细胞计数：阴道分泌物白细胞计数在滴虫阴道炎、AV、子宫颈炎及盆腔炎时常常升高，一般认为阴道分泌物白细胞计数>10个/高倍视野时提示可能存在上述炎症，需要仔细鉴别其原因。

2. 功能学检测指标：

（1）pH值：精密pH试纸（检测范围3.8~5.4）测试阴道分泌物的pH值。pH 值检测操作的注意事项：干棉签检测pH值，以免影响结果。

（2）生物化学指标：阴道中不同的微生物可产生不同的代谢产物以及不同的酶的活性。因此，根据不同的微生物的代谢产物及酶的活性设立不同的标志物。具体指标如下：

①乳杆菌功能标志物：乳杆菌的代谢产物包括乳酸菌素、H2O2、乳酸。H2O2浓度与产H2O2的乳杆菌属的数量呈正相关，可根据H2O2浓度判定乳杆菌功能是否正常。

②其他微生物的代谢产物及酶的活性：(a)厌氧菌：大多数唾液酸苷酶(neuraminidase)阳性；(b)需氧菌：部分β-葡糖醛酸糖苷酶（β-glucuronidase）及凝固酶（coagulase）阳性；(c)白假丝酵母菌：部分门冬酰胺蛋白酶(asparaginasum)及乙酰氨基葡糖苷酶（acetylglucosaminidase）阳性；(d)滴虫：部分胱胺酰蛋白酶（cysteinase）阳性；(e)非特异性指标：部分阴道加德纳菌、不动弯杆菌及白假丝酵母菌，脯氨酸氨基肽酶(proline aminopeptidase)阳性。

③机体炎症反应标志物：白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比，能间接反映致病微生物的增殖水平。白细胞酯酶阳性提示阴道分泌物中有大量多核白细胞被破坏从而释放该酶，阴道黏膜受损，存在炎症反应。

资料来源 中华妇产科杂志2016 年10月第51卷第10期第721-723页

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